??? 根據(jù)《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》第七十六條規(guī)定，國家藥監(jiān)局審核批準(zhǔn)《貼敷類醫(yī)療器械中17種化學(xué)藥物識別及含量測定補充檢驗方法》，現(xiàn)予發(fā)布。
? 特此公告。
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國家藥監(jiān)局
2022年1月25日
??? 附件
貼敷類醫(yī)療器械中17種化學(xué)藥物
識別及含量測定補充檢驗方法
??? 1?適用產(chǎn)品范圍
??? 本方法適用于以物理升溫、物理退熱、穴位壓力刺激或者磁場作用等原理的貼敷類醫(yī)療器械。品名舉例：遠(yuǎn)紅外治療貼、醫(yī)用冷敷貼、醫(yī)用退熱貼、冷敷凝膠、磁療貼、穴位壓力刺激貼等。
??? 本方法不適用于以鐵粉氧化升溫致熱為工作原理的熱療貼、熱灸貼等產(chǎn)品。
??? 2?規(guī)范性引用文件
??? 下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
??? GB/T 6682?分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。
??? 3?通則
??? 3.1本方法中的室溫，如無特殊規(guī)定，應(yīng)為10 ℃～30 ℃。
??? 3.2本方法中試驗用水應(yīng)符合GB/T 6682的要求。
??? 3.3本方法中所用容器如無特殊規(guī)定，應(yīng)為硅硼酸鹽玻璃容器。
??? 3.4本方法中所涉及的量取，應(yīng)使用符合相應(yīng)國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的準(zhǔn)確度要求的移液管量取。
??? 4?測定方法
??? 4.1?概述
??? 高效液相色譜儀的二極管陣列檢測器（DAD）能夠進行全波長掃描，靈敏度較高，且應(yīng)用普遍、易于操作。高分辨的一級（MS）、二級質(zhì)譜（MS2）數(shù)據(jù)能夠給出更加準(zhǔn)確可靠的結(jié)構(gòu)信息。本方法采用高效液相色譜法（HPLC）進行初篩，高分辨液質(zhì)聯(lián)用法（HRMS/MS）或等效的液質(zhì)聯(lián)用法進行驗證，驗證后的陽性樣品采用高效液相色譜法（HPLC）進行含量測定。
??? 4.2?供試液的制備
??? 取樣品1貼，撕開不粘層，展開，貼在定量濾紙上，用剪刀裁去多余濾紙，然后將樣品剪成0.5 cm×0.5 cm的小片，置于150 mL燒瓶中，加入甲醇適量將樣品完全浸沒，70 ℃回流兩次，每次2 h。將浸提液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用少量甲醇洗滌樣品三次，合并洗滌液至容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻。取上述溶液經(jīng)0.2 μm微孔濾膜過濾后作為供試液，必要時可進行適當(dāng)倍數(shù)的稀釋。
??? 4.3高效液相色譜法
??? 4.3.1?儀器與試劑
??? 4.3.1.1?儀器
??? 高效液相色譜儀，配有二極管陣列檢測器。
??? 4.3.1.2?試劑
??? a）甲醇：色譜純，CAS# 67-56-1；
??? b）乙腈：色譜純，CAS# 75-05-8；
??? c）磷酸：分析純，CAS# 7664-38-2；
??? d）17種藥物信息見表1。
表1?17種藥物信息
|
編號
|
名稱
|
CAS號
|
分子式
|
|
1
|
氨基比林
|
58-15-1
|
C13H17N3O
|
|
2
|
甲氧芐啶
|
738-70-5
|
C14H18N4O3
|
|
3
|
對乙酰氨基酚
|
103-90-2
|
C8H9NO2
|
|
4
|
潑尼松
|
53-03-2
|
C21H26O5
|
|
5
|
氫化可的松
|
50-23-7
|
C21H30O5
|
|
6
|
地塞米松
|
50-02-2
|
C22H29FO5
|
|
7
|
水楊酸甲酯
|
119-36-8
|
C8H8O3
|
|
8
|
醋酸潑尼松
|
125-10-0
|
C23H28O6
|
|
9
|
醋酸可的松
|
50-04-4
|
C23H30O6
|
|
10
|
酮洛芬
|
22171-81-5
|
C16H14O3
|
|
11
|
萘普生
|
22204-53-1
|
C14H14O3
|
|
12
|
醋酸地塞米松
|
1177-87-3
|
C24H31FO6
|
|
13
|
保泰松
|
50-33-9
|
C19H20N2O2
|
|
14
|
氟比洛芬
|
5104-49-4
|
C15H13FO2
|
|
15
|
布洛芬
|
15687-27-1
|
C13H18O2
|
|
16
|
吲哚美辛
|
53-86-1
|
C19H17ClNO4
|
|
17
|
雙氯芬酸鈉
|
15307-79-6
|
C14H10Cl2NNaO2
|
?? 4.3.2藥物對照品儲備溶液的配制
?? 分別取4.3.1.2中17種藥物對照品各約10 mg，精密稱定，置10 mL棕色容量瓶中，加入甲醇溶解后定容，搖勻，配制成濃度為1 mg/mL的藥物對照品儲備溶液。
??? 4.3.3高效液相色譜條件（推薦）
??? 4.3.3.1色譜柱：XBridge BEH Shield RP18 2.5 μm4.6×150 mm，或其他等效色譜柱。
??? 4.3.3.2柱溫：35 ℃，樣品室溫度：10 ℃；
??? 4.3.3.3流速：1 mL/min；
??? 4.3.3.4檢測波長：220 nm，掃描范圍：190 nm～400 nm；
??? 4.3.3.5進樣量：10 μL。
??? 4.3.3.6流動相：A（pH 3.0的磷酸水溶液）B（甲醇：乙腈?1：1），梯度條件見表2。
表2?HPLC法流動相梯度條件
|
時間（min）
|
A（%）
|
B（%）
|
|
0
|
94
|
6
|
|
8
|
45
|
55
|
|
20
|
45
|
55
|
|
25
|
10
|
90
|
|
26
|
10
|
90
|
|
26.5
|
94
|
6
|
|
30
|
94
|
6
|
??? 4.3.4系統(tǒng)適應(yīng)性試驗
??? 4.3.4.1?分離度
??? 取4.3.2中17種藥物對照品儲備溶液各0.1 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成濃度為10 mg/L的混合對照溶液，取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，17種對照品的色譜峰與相鄰色譜峰之間的分離度應(yīng)大于1.5。
??? 4.3.4.2?靈敏度
??? 取4.3.2中17種藥物對照品儲備溶液適量，分別用甲醇稀釋至表3中“檢出限（LOD）”的濃度，取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，17種對照品的色譜峰信噪比（S/N）均應(yīng)大于3:1。
??? 表3?17種藥物靈敏度要求
|
編號
|
名稱
|
檢出限LOD?（mg/L）
|
|
1
|
氨基比林
|
1.5
|
|
2
|
甲氧芐啶
|
0.2
|
|
3
|
對乙酰氨基酚
|
0.2
|
|
4
|
潑尼松
|
0.2
|
|
5
|
氫化可的松
|
0.2
|
|
6
|
地塞米松
|
0.2
|
|
7
|
水楊酸甲酯
|
0.5
|
|
8
|
醋酸潑尼松
|
0.5
|
|
9
|
醋酸可的松
|
0.5
|
|
10
|
酮洛芬
|
0.2
|
|
11
|
萘普生
|
0.05
|
|
12
|
醋酸地塞米松
|
0.5
|
|
13
|
保泰松
|
0.5
|
|
14
|
氟比洛芬
|
0.5
|
|
15
|
布洛芬
|
0.5
|
|
16
|
吲哚美辛
|
0.5
|
|
17
|
雙氯芬酸鈉
|
0.2
|
??? 4.4高分辨液質(zhì)聯(lián)用法
??? 4.4.1?儀器與試劑
??? 4.4.1.1?儀器
??? 高分辨液質(zhì)聯(lián)用儀
??? 4.4.1.2?試劑
??? a）甲醇：質(zhì)譜純，CAS# 67-56-1；
??? b）乙酸銨：質(zhì)譜純，CAS# 631-61-8；
??? c）17種藥物對照品同4.3.1.2 d）。
??? 4.4.2對照品溶液配制
??? 同4.3.4.1中濃度為10 mg/L的混合對照溶液配制。
??? 4.4.3色譜條件（示例）
??? 4.4.3.1色譜柱：Hypersil Gold 100×2.1 mm 1.9 μm，或其他等效色譜柱。
??? 4.4.3.2?柱溫：40 ℃，樣品室溫度：10 ℃；
??? 4.4.3.3?流速：0.2 mL/min；
??? 4.4.3.4?檢測波長：220 nm；
??? 4.4.3.5進樣量：2 μL。
??? 4.4.3.6?流動相：A（10 mmol/L乙酸銨的水溶液）B（甲醇），梯度條件見表4。
表4?HPLC-HRMS/MS法流動相梯度條件
|
時間（min）
|
A?（%）
|
B?（%）
|
|
0
|
90
|
10
|
|
1
|
90
|
10
|
|
7
|
5
|
95
|
|
11
|
5
|
95
|
|
12
|
90
|
10
|
|
15
|
90
|
10
|
??? 4.4.4質(zhì)譜條件（示例）
??? 4.4.4.1?儀器型號：Themo Q-Exactive Focus型高分辨液質(zhì)聯(lián)用儀。
??? 4.4.4.2?離子源：ESI掃描模式：正負(fù)切換；
??? 4.4.4.3?鞘氣：30 arb輔助氣：8 arb?吹掃氣：0 arb；
??? 4.4.4.4?電噴霧電壓：3.0 kV；
??? 4.4.4.5?毛細(xì)管溫度：320 ℃；
??? 4.4.4.6?傳輸透鏡電壓：55.0 %；
??? 4.4.4.7?輔助氣加熱溫度：300 ℃；
??? 4.4.4.8 17種藥物測定參數(shù)見表5。
表5?17種藥物檢測模式、二級能量及碎片離子
|
編號
|
名稱
|
檢測
模式
|
m/z
|
碎片信息
|
能量（NCE）
|
|
1
|
氨基比林
|
﹢
|
232.1444
|
113*,139,187,217
|
20
|
|
2
|
甲氧芐啶
|
﹢
|
291.1452
|
123*,201,245,261,275
|
50
|
|
3
|
對乙酰氨基酚
|
﹢
|
152.0706
|
65,92,110*,134
|
50
|
|
4
|
潑尼松
|
﹢
|
359.1853
|
147*,237,313,341
|
25
|
|
5
|
氫化可的松
|
﹢
|
363.2176
|
97,121*,173,267,309,327,345
|
25
|
|
6
|
地塞米松
|
+
|
393.2072
|
147,237,319,337,355*,373
|
15
|
|
7
|
水楊酸甲酯
|
﹣
|
151.0390
|
75,91*,93,119,121
|
60
|
|
8
|
醋酸潑尼松
|
﹢
|
401.1959
|
147,237,295*,313,341,383
|
18
|
|
9
|
醋酸可的松
|
﹢
|
403.2115
|
101,163?*,325,343,361
|
25
|
|
10
|
酮洛芬
|
﹢
|
255.1017
|
105,177,209*
|
21
|
|
11
|
萘普生
|
﹢
|
231.1017
|
170,185*
|
20
|
|
12
|
醋酸地塞米松
|
﹢
|
435.2177
|
147,237,309,397*,415
|
15
|
|
13
|
保泰松
|
﹢
|
309.1598
|
120,146,160?*,211
|
35
|
|
14
|
氟比洛芬
|
-
|
243.0817
|
199*
|
20
|
|
15
|
布洛芬
|
﹣
|
205.1223
|
159*
|
10
|
|
16
|
吲哚美辛
|
﹣
|
356.0684
|
111,297,312*
|
10
|
|
17
|
雙氯芬酸鈉
|
﹣
|
294.0094
|
250*
|
10
|
??? 注：*為基峰
??? 4.5藥物識別及其含量測定
??? 取4.2制備的供試液及4.3.4.1制備的10 mg/L的混合對照溶液，按照4.3.3的方法進樣分析。將二者結(jié)果進行對比，以保留時間（tR）及190 nm~400 nm的紫外光譜圖一致性作為初篩依據(jù)。
??? 取可能含有藥物的供試液及相應(yīng)藥物對照品溶液，按照4.4.3、4.4.4的方法進樣分析。將供試液與對照品溶液的母離子及碎片離子信息進行對比，二者一致則確認(rèn)該樣品中含有相應(yīng)的藥物成分。
??? 取4.3.2中陽性樣品中所含藥物的對照品儲備溶液，配制成系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照4.3.3的方法進樣分析。繪制濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)峰面積計算樣品中藥物的量。圖1給出了17種藥物的典型色譜圖。
? 圖1?17種藥物典型色譜圖
??? 4.6其他藥物識別方法
??? 本方法中給出了17種藥物的識別和含量測定方法，如關(guān)注其他可能添加的藥物，也可采用經(jīng)方法學(xué)驗證的方法進行分析。
??? 5?結(jié)果判定
??? 供試液中不得檢出上述17種藥物成分（檢出限見表3）。
??? 起草單位：山東省醫(yī)療器械和藥品包裝檢驗研究院
??? 復(fù)核單位：深圳市藥品檢驗研究院
??? 安徽省食品藥品檢驗研究院